انجام تستهای ژنتیک مولکولی کمی توسط روش Real_Time PCR

[vc_row][vc_column][vc_column_text css=”%7B%22default%22%3A%7B%22font-weight%22%3A%22100%22%2C%22font-size%22%3A%2212px%22%2C%22line-height%22%3A%2228px%22%7D%7D”]

از دهه ۱۹۹۰ به بعد با ایجاد تغییراتی در واکنش PCR، روش Real time-PCR ابداع شد که با این روش می توان بطور دقیق کمیت ویروس و باکتری ها را نیز اندازه گیری کرد از اینرو به آن PCR کمی نیز اطلاق می شود. بنابراین در این روش می توان یک توالی خاص را در DNAی هدف، شناسایی کرده و همچنین مقدار آن را نیز به طور دقیق اندازه گیری نمود.

در تکنیک Real-time PCR، دقیق ترین و قابل اعتمادترین نتایج با استفاده از کاوش گر (Probe) فلورسانس بدست می آید. بنابر این حتى در حضور سایر انواع DNA، نتایج حاصل از نظر اختصاصی بودن، در حد بسیار بالائی است. در این شرایط، چنانچه از کاوش گرهای اختصاصی با رنگهای مختلف استفاده شود، حتی می توان ژن های متعددی را در یک واکنش، مورد بررسی قرار داد.

[/vc_column_text][us_image image=”13425″ size=”full” align=”center” css=”%7B%22default%22%3A%7B%22text-align%22%3A%22center%22%7D%7D”][/vc_column][/vc_row][vc_row][vc_column stretch=”1″][us_page_block id=”13722″][/vc_column][/vc_row][vc_row][vc_column width=”2/3″][us_message color=”yellow” css=”%7B%22default%22%3A%7B%22background-color%22%3A%22_content_overlay%22%7D%7D”]با استفاده از Real-time PCR می توان وجود طیف وسیعی از پاتوژن های ویروسی، قارچی و باکتریایی را با دقت و سرعت بسیار بالا تشخیص داده و اندازه گیری کرد. از جمله این پاتوژن ها می توان به انواع هپاتیت، سل، هرپس ویروس، ایدز و موارد زیر اشاره کرد:

[/us_message][vc_column_text]

در صنایع مختلف تکنیک real time pcr  جهت تکثیر dna  و تعیین مقدار کمی آن به صورت همزمان، به کار میرود. این عمل باعث شناسایی توالی های اختصاصی dna  و تعیین مقدار آن در یک نمونه میشود.

روش Real time PCR جهت شناسایی باکتریها، قارچها و ویروسها در داروهای پروتئینی به کار رفته است استفاده از Real time PCR جهت شناسایی اختصاصی ناخالصیهای DNA در پلاسمیدها نیز گزارش شده است در سالهای اخیر روش Real time PCR بر مبنای استفاده از رنگ ISYBR Green جهت شناسایی ناخالصی DNA ناشی از تخمدان همستر چینی به عنوان میزبان، در محصولات دارویی به کار رفته است

با توجه به صرف وقت زیاد، هزینههای بالا و حساسیت نسبتأ پائین روشهای پیشین، به کارگیری روش بسیار حساس و اختصاصی Real time PCR بر مبنای استفاده از رنگ در تشخیص ناخالصیهای DNA ناشی از باکتری ها در محصول دارویی نوترکیب اینترفرون براساس توالی 16S rRNA میباشد که در آن، امکان تشخیص آلودگیهای DNA تا حد کمتر از یک پیکوگرم، امکانپذیر شده است.

در این روش ابتدا نمونه را کشت داده و ژنوم باکتری را استخراج میکنند. بعد از طراحی پرایمر خاص، واکنش Real Time PCR انجام می شود.

[/vc_column_text][/vc_column][vc_column width=”1/3″][us_image image=”13427″][/vc_column][/vc_row][vc_row height=”auto”][vc_column][us_image image=”13432″ size=”full” align=”right”][/vc_column][/vc_row]